培養基是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配制而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。
培養基的配制:
1.配料
配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。
2.溶解
淀粉溶解:少量冷水調成糊狀。
加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃ ,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
3.調PH
用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養基調節到所要求的值。
4.過濾
濾紙或棉花進行過濾。(有時可以省去)
5.分裝
一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養,則100ml培養基/250ml的三角瓶,最多不能超過150ml培養基/250ml的三角瓶,否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養,則15-20ml培養基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度;固體斜面培養基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。
6.包扎
分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。
7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養成分會被破壞,培養基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。
8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的1/2。
9.貯存
培養基在30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。